HELF (人胚肺成纖維細胞)

生長培養(yǎng)基：DMEM+10% FBS+1% P/S

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

貼壁細胞傳代培養(yǎng)：

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基。

2. 加入1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量）。

3. 加入2mL培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。

4. 離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細胞培養(yǎng)基至總體積為4mL。

5. 將細胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

傳代比例：建議 1:6 至 1:9

培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。

懸浮細胞傳代培養(yǎng)：

懸浮細胞的傳代可通過補加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來完成，具體做法如下：

1. 取出少量細胞懸液進行細胞計數(shù)及活力檢測，當(dāng)細胞密度達到1×10⁶ cells/mL 時，進行細胞傳代培養(yǎng)。

2. 取足量細胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，將細胞密度維持在2-3×105cells/mL。

3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%CO²的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細胞達到傳代培養(yǎng)的密度，則進行傳代培養(yǎng)。

培養(yǎng)基換液: 每隔2至3天。

注意：培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋以保持培養(yǎng)基與空氣和CO²

拆包 & 存儲：

1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟：

對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對于貼壁培養(yǎng)的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細胞置于含有5% CO²的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，請立即傳代。

3. 對于懸浮培養(yǎng)的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO²的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存細胞操作步驟：

注意：為保存細胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4. 用培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復(fù)蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細胞置于含有5%CO²的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞產(chǎn)品的售后政策： 

1、收到細胞24小時內(nèi)出現(xiàn)細菌、真菌、霉菌污染，72小時檢測支原體陽性無條件重發(fā)；

2、享有1個月的超長售后免責(zé)期；  

3、1個月內(nèi)，如果第三方鑒定STR錯誤，可退細胞款項。

4. 細胞運輸途中遭遇的問題：丟件、瓶身破損、培養(yǎng)液滲漏；

5. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品24小時內(nèi)，給我們提供真實有效實驗結(jié)果，供核實；

6. 常溫發(fā)貨的細胞經(jīng)過24小時靜置后，有大部分細胞未存活（需提供真實、清晰的細胞狀態(tài)照片）

7. 干冰凍存管發(fā)貨的細胞復(fù)蘇之后，有大部分細胞未存活（需提供真實、清晰的細胞狀態(tài)照片）

僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產(chǎn)品和服務(wù)。