NCI-H1734 (人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)

細(xì)胞系收貨須知

收到的貨物會包含以下幾種類型，您的貨物屬于：

□細(xì)胞凍存管：收到貨物后，請檢查箱子里面是否還有干冰。

● 若干冰已剩余不多，不能掩埋凍存管，請及時(shí)拍照，并第一時(shí)間聯(lián)系銷售。

● 若干冰充裕，可以安排復(fù)蘇細(xì)胞；不安排復(fù)蘇，請將細(xì)胞凍存管轉(zhuǎn)移到液氮進(jìn)行保存。短期（一周內(nèi)）的存放可以放在-80冰箱，建議最好保存在液氮中。

□培養(yǎng)瓶的活細(xì)胞：收到請檢查培養(yǎng)瓶是否完好，是否有漏液，培養(yǎng)基是否渾濁

●若出現(xiàn)以上問題請于當(dāng)天和我們銷售取得聯(lián)系，我們會第一時(shí)間為您處理。

● 若以上問題都沒有出現(xiàn):拆掉培養(yǎng)瓶的外包裝，在顯微鏡下對細(xì)胞進(jìn)行多個(gè)視野，不同倍鏡拍照。然后用酒精對瓶身進(jìn)行消毒，放在37度二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行復(fù)溫。1-2小時(shí)后，拿出在顯微鏡下觀察，并進(jìn)行多個(gè)視野不同倍鏡拍照。若細(xì)胞達(dá)到了可以傳代的密度，請及時(shí)進(jìn)行傳代。若細(xì)胞密度不能進(jìn)行傳代，請回收培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，留適量培養(yǎng)基在瓶中，并將培養(yǎng)瓶放在培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。

□消化后的細(xì)胞懸液：收到請檢查管子是否有漏液

●若漏液，請當(dāng)天和我們銷售取得聯(lián)系，我們會第一時(shí)間為您處理。

●若完好，將管子用酒精消毒，收集細(xì)胞懸液到離心管，1000轉(zhuǎn)，離心5分鐘，棄上清，加入培養(yǎng)基重懸，按照          比例分裝到     個(gè)T25培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充培養(yǎng)基到     ml即可

細(xì)胞操作詳細(xì)步驟----貼壁細(xì)胞

1.細(xì)胞復(fù)蘇

1.1離心法

1.1.1準(zhǔn)備一個(gè)T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶并做好標(biāo)記，預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基，一支15ml離心管，離心管中加入4-5ml細(xì)胞培養(yǎng)基。

1.1.2取出細(xì)胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.1.3將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到加有培養(yǎng)基的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

1.1.4倒掉上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞亦可先將細(xì)胞團(tuán)彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

1.1.5將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2不離心法

1.2.1準(zhǔn)備一個(gè)T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶并做好標(biāo)記，預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶中加入8ml左右培養(yǎng)基。

1.2.2取出細(xì)胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.2.3將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到加有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，接種16小時(shí)后更換培養(yǎng)基。

2.細(xì)胞傳代

2.1準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

2.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞1-2次。

2.3加入1ml胰酶，室溫或者37度消化，直到細(xì)胞成片脫落，加入3-4ml培養(yǎng)基終止消化，如果有成團(tuán)塊脫落的細(xì)胞可輕輕吹打分散細(xì)胞后再終止消化。（注意：消化時(shí)間與所用胰酶效價(jià)，消化時(shí)候細(xì)胞密度以及溫度等因素有關(guān)，建議第一次消化時(shí)候，多在顯微鏡下觀察，以找到最佳消化時(shí)間）

2.4收集細(xì)胞懸液，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞亦可先將細(xì)胞團(tuán)彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

2.5將重懸好的細(xì)胞按比例分裝至T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

3.細(xì)胞凍存

3.1準(zhǔn)備細(xì)胞凍存液，細(xì)胞凍存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

3.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞1-2次。

3.3加入1ml胰酶，室溫或者37度消化，直到細(xì)胞成片脫落，加入培養(yǎng)基終止消化，如果有成團(tuán)塊脫落的細(xì)胞可輕輕吹打分散細(xì)胞后再終止消化。

3.4收集細(xì)胞懸液，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清。

3.5加入凍存液，重懸細(xì)胞，并分裝到凍存管，凍存密度0.8-1.5×10⁶細(xì)胞/ml。

3.6將凍存管放入程序降溫盒，并放到-80℃冰箱，過夜后將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮保存。

4.注意事項(xiàng)

4.1建議收到細(xì)胞后先用我們配套的培養(yǎng)基和血清。收到活細(xì)胞的客戶培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同實(shí)驗(yàn)室操作上會有些許差異，為了避免細(xì)胞不適應(yīng)，請先按照說明書推薦的方法和操作步驟培養(yǎng)，待細(xì)胞凍存后可根據(jù)自己的習(xí)慣操作看細(xì)胞是否能夠適應(yīng)。

4.3建議收到細(xì)胞后，前幾代及時(shí)凍存一些細(xì)胞，并最好是可以多凍存幾個(gè)批次
僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個(gè)人提供產(chǎn)品和服務(wù)。以實(shí)際收貨產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)，網(wǎng)站說明書僅供參考。